一、原理
定量的抗原加入到含有一定量的相应抗体的琼脂糖凝胶中，在电场作用下，引起抗原抗体的迁移和相互反应，当比例合适时形成肉眼可见的沉淀峰，由于电泳继续进行，样品孔不断有抗原移向抗原抗体复合物的沉淀峰，因抗原过剩使沉淀溶解而在前面又形成新的抗原抗体复合物的沉淀峰。如此反复向前，直到再无游离抗原而反应终止，形成上行火箭状的沉淀峰，其沉淀峰高度和抗原的浓度成正比，与同样条件下的已知浓度的抗原
血清比较，即可求得待测血清的抗原含量。
二、试剂（以ApoB为例）
1．琼脂糖。
2．巴比妥钠缓冲液（μ=0.05，pH=8.6）:巴比妥钠10.30g，巴比妥1.84g、甘氨荎1.0g、Peg 60004g，加900ml水加温助溶，待冷，加1mol/L调pH至8.6，混匀，转入1000ml容量瓶内，再加水到刻度，测试pH后装瓶待用。
3．羊抗人ApoB血清（效价1：128以上）
4．ApoB标准血清。
5．固定液：1%鞣酸或10%三氯醋酸。
6．氨基黑10B染色液：氨基黑10B0.1g，溶于100ml甲醇-醋-水溶液（7：1：2）。
三、操作
1．用巴比妥钠缓冲液配制1.5%琼脂糖液，在水浴煮溶，置56℃水箱备用。
2．取巴比妥钠缓冲液3.36ml入小三角烧瓶内，再加抗人ApoB抗血清0.04ml，充分混和，预温至56℃。
3．在预温至56℃的3.4ml抗血清缓冲液内，加入1.5%琼脂糖3.5ml，混匀，立即倒入预封好的有机玻璃架内，待凝。
4．用打孔器按图打孔，孔径3mm。孔距3mm。
5．置凝胶板于水平电泳槽内，两极用三层滤纸搭桥，抗原一端接阴极，另一端接阳极。
6．以电压12V/cm通电，用微量进样器准确加入等测血清5μl（1：20或1：30稀释）。
电泳2～3h后，关闭电源，置凝胶板于10.0%三氯醋酸液固定15～20min，取出胶板，在黑色背景灯光下量取沉淀峰高度，如图18-3所示。
一、原理
将抗载
脂蛋白血清均匀地混合于琼脂糖凝胶内，打孔，加样。孔中待测样品的抗原辐射状向含抗体的胶内扩散，至抗原与抗体的量达一定比例时形成可见的沉淀环。一定条件下沉淀环的直径或面积与相应的抗原Apo含量成正比。
二、试剂
1.0.05mol/L pH8.2巴比妥钠-HCl缓冲液；巴比妥钠15.8g加水至1000ml。以1.17mol/l HCl调pH至8.2，约1.17mol/L Hcl（浓HCl 19.3ml加水180.7ml）18.36ml，最后以蒸馏水补足至1421.8ml。
2．24.0g/L琼脂糖：优质琼脂糖粉2.4g，硫柳汞0.01g，加0.05mol/l pH8.2巴比妥钠HCl缓冲液100ml，加热融化后，根据浇注板的大小分装，每管5.8ml、3.4ml、1.5ml，加塞后4℃或室温保存。
3．0.1g/L硫柳汞生理盐水：1000ml生理盐水中含硫柳汞0.1g。
4．抗血清：临用前根据浇注板的大小，按效价稀释。
三、操作
1．浇注琼脂糖凝胶板
取“凹”型有机玻璃框架，厚1.6mm，两边夹6×12cm玻璃，再用铁夹夹紧玻璃待用。
加热融化24.0g/L琼脂糖，56℃水浴保温。根据抗Apo血清效价，按表18-19进行配制。
将稀释的抗血清倾入已融化的琼脂糖中，颠倒混匀1～2次，避免产生气泡，迅速浇注预置水平位置的双层玻板内，待凝。抗血清效价高时，亦可直接将抗血清混入12.0g/L琼脂中，摇匀后制板。
2．按模式图用直径3mm的金属管打孔，6×12cm免疫扩散板打孔28个，6×8cm免疫扩散板打孔16个。
3．待测血清用硫柳汞盐水稀释（按说明书），用微量加样器每份标本加1孔。加样量10μl。置湿盒（水平位置）37℃扩散24h，测沉淀环直径，如图18-2所示。
4． 标准曲线的制备（参考方法）
（1）参考血清稀释法：取Apo含量标准参考血清用盐水稀释成梯度浓度。ApoAⅠ：20、40、60、80、100mg/dl，同上法操作加样，每一稀释浓度应在两块板的不同位置各加样孔，每孔5μl。37℃湿盒扩散24h，测沉淀环直径，求出各稀释度均值。制作标准曲线。
（2）用半对数纸制作：以抗原含量为纵坐标（对数），沉淀环直径为横坐标，在半对数纸上作图。一般要求至少有4个不同稀释度。增加标准曲线上的点数；可增加其可靠程度。
（3）用推算平均值法制备标准曲线：RID定量法尽管严格遵守所有的试验条件，但不同浓度所求得的沉淀环直径，在绘制曲线时仍然常不在一条直线上，推算平均值法是通过数学方法处理，使不在标准曲线上的各点回归到同一直线上来。可用公式log y=ax＋b表示。
结果判断
根据待测血清在含抗Apo血清免疫扩散板上形成的沉淀环直径，查标准曲线即可行相应Apo的含量。可以mg/dl报告，也可以国际单位报告（g/L）
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